妹仔~ 讓曾經度過漫漫"西方人生"的姐姐來回你一下
從你的狀況我看到幾個關鍵字
1. 電泳跑不動 =>running buffer pH和濃度對不對
電壓設定夠不夠強
2. 只要一小時你跑了12小時=> 電壓到底對不對啊??
先假設你的stacking gel有跑過去, 在separating gel卡關
=>separating gel濃度過高
如果是連stacking gel都跑很慢=>膠體濃度肯定有錯
3. 染完的膠全部碎掉=>妳配的膠肯定有問題 濃度太高太硬 才會碰撞就碎光光
(如果是濃度太低 那會變成鼻涕糊)
4. 膠台會漏=> 置膠器用久了會這樣是正常的
先檢查玻璃有沒有破掉或缺角
底下海綿有沒有放平整
最重要的絕招 上面夾子夾好後再插一根blue tip (讓他用力夾~~~~)
然後 用tip加入1mL 酒精 看他會不會漏
如果漏了就重夾 不會漏就把酒精倒掉 再接著繼續做膠
5. 如果妳的漏是指跑膠的時候 兩片膠中間的buffer會跑到外面
=>請浪費buffer 把內外都加到一樣高的水平面 就不會漏了
或是在外層那裡放一塊冰保/50mL離心管加水製的冰 讓外層跟內層的水平面等高
實驗就是這樣 越急越容易出錯......
所以姐建議你先去吃晚餐 洗個澡 看一下結衣整理一下心情
明天拿出你的protocol 把所有buffer 親自重新配過
然後再做一次 這次先不要放樣品
只單跑marker 確定這次做的膠和buffer可以了 再開始跑你的樣品
姐曾經買的是整組配好的各種buffer
結果還是跑出富士山 就因為同事分裝時搞混+標錯.... 所以當然配出一坨沒辦法用的膠
做實驗最好從一開始的buffer就自己配一套 不要混用!!
最後 姐勸你好好誠實的告訴老師你失敗了 態度要低
實驗失敗絕對有原因 而且在你 不要急著澄清說你都有照做
(就算是buffer前人配錯 但你沒事前check 所以還是算你的)
有時候逃避很可恥但有用 但在實驗室不但沒用還會被黑 (茶)
加油啦~
ps. 我還以為我來到生科版.......囧
※ 引述《chith (74)》之銘言：
: 明明只是個簡單的SDS
: 為什麼可以出那麼多狀況
: 為什麼電泳跑不動
: 為什麼無論我怎麼裝它都會漏水
: 明明只要一小時的東西我用起來跑了快要12小時
: 為什麼染完的膠全部碎掉變成一坨
: 有好多人在等我的實驗結果
: 大家都要做報告
: 大家都準備了樣品給我跑膠
: 我居然跑到膠碎掉了
: 也已經沒有多餘的樣品重做了
: 到現在還不敢跟老師說我又搞砸了
: 不知道該怎麼跟同學交代話花三個星期做的實驗居然在最後ㄧ步驟失敗了
: 好害怕......
: 好想哭......

後來我跑第二片膠就成功了現在留下來重做第一片，大概明天才會跑完......

推，然後給原po拍拍，恭喜你做出來了但是之後還是要找出來是哪裡出了問題哦，不然下次還是有可能再發生的

有認真有推欸不過明天要跑就明天做就好啦 ，不然pH會跑掉吧 ，做膠才一小時

專業解說，你人真好~~~~

生科版 好溫馨 實驗一直失敗 真的心情會很沮喪 QQ