Effects of the pH Dependence of
3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan
Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay
反正重點就是
MTT主要透過
被活細胞上的粒線體 上面的電子傳遞
將化合物還原成有顏色的結晶體
每種細胞株再加入固定量的MTT dye後
相同時間細胞能產生的最大結晶量有所不同
這取決於細胞的大小
細胞生長速度
培養液的種類等等
在細胞數較稀疏 或是pH值較高的情況下
結晶溶出來的顏色 在570nm有最大吸光值
但在細胞生長過密集 或是環境pH值較低
溶出的顏色在會變成吸光值在510nm有主高峰 570nm變成次高峰
所以為了突破細胞密集程度 與 環境pH值的限制
所以才要加pH10.5的 buffer
然後靠杯喔
我查了其他網站sorenson’s buffer都不是加sodium citrate
所以布比問一下你們老師 sodium citrate到底是幹什麼的
我很好騎

哲維突然發這種文章有點不習慣

蛤 你都要融甲饡出來測吸光度了 為啥pH變吸光峰值會變?是解離還是會分解?

影響溶解程度…的樣子我也在想 為啥會從一個pick變兩個pick總之就是細胞長太滿或培養基太酸會讓結晶溶不出來

不是磷酸鹽就不能叫sorenson’s 吧 檸檬酸鹽應該叫另一種名稱了 不同鹽基的buffer 名稱就不一樣

那加buffer就是要控制後面pH過低融不出來的問題r 細胞長太多這問題應該不是萃取甲攢的時候改變操作條件就能解決的問題ㄅ?

因為細胞是活的 裡面很多反應在進行著 pH變化會發生啥也還搞不清楚

還是他其實是在MTT行程階段的時候加buffer 不是溶開結晶的時候加

我看人家流程都是MTT+buffer弄成溶液去萃取阿 細胞培養環境pH變了那個琥珀三洨酶活性也不一樣ㄅ?所以應該是加dmso下去前就有buffer惹修正一下 mtt+buffer去給細胞吃

https://i.imgur.com/BmKMmSW.jpg 結果我後來發現我們用的結晶紫方法(右下)跟你們的MTT其實還是不同的(?

染的東西不一樣啊 要看你要幹嘛吧mtt染粒腺體看存活率 因為死細胞粒腺體沒活性染布上去